Rún Mear-Tástáil Sróine Adenovirus
SARS-CoV-2 Cuirtear trealamh Tástála Aigéad Núicléigh i bhfeidhm maidir le braite cáilíochtúil d’aigéad núicléasach COVID-19 i táithíní nasopharyngeal, táithíní oropharyngeal agus sputum. Soláthraíonn na torthaí tástála bunús diagnóis mhóilíneach d’ionfhabhtú nó d’othair amhrasta, agus níor cheart iad a úsáid mar an t-aon chritéar amháin le haghaidh diagnóis chliniciúil.
Cur síos
Úsáid Beartaithe:
SARS-CoV-2 Cuirtear trealamh Tástála Aigéad Núicléigh i bhfeidhm maidir le braite cáilíochtúil d’aigéad núicléasach COVID-19 i táithíní nasopharyngeal, táithíní oropharyngeal agus sputum. Soláthraíonn na torthaí tástála bunús diagnóis mhóilíneach d’ionfhabhtú nó d’othair amhrasta, agus níor cheart iad a úsáid mar an t-aon chritéar amháin le haghaidh diagnóis chliniciúil.
Ábhair:
Méadair | Sonraíochtaí | Dath lid | Comhdhéanamh |
Meascán Frithghníomhaithe COVID{0}} | 1165µL ×1 feadán | Donn | Maolán, dNTPs, Primers, Tóraithe. |
COVID{0}}Enzyme Mix | 85µL ×1 feadán | Gorm | Taq DNA polymerase, Droim ar ais Transcriptase, UDG |
Rialú Dearfach | 200 µL ×1 feadán | Buí | Pseudovirus de Spriocghéine agus IC |
Rialú Diúltach | 200 µL × 1 feadán | Gan dath | ddH2O |
Nós Imeachta Tástála:
A. Ullmhúchán Samplach
Is é RNA asbhainte an t-ábhar tosaigh don trealamh Tástála Aigéad Núicléach SARS-CoV-2.
Tábhachtach: Ní mór gach nós imeachta eastósctha aigéid núicléigh a dhéanamh go comhuaineach le rialú Dearfach amháin (40 μL, caol le tuaslagáin salanda steiriúla/PBS go dtí an toirt inmhianaithe) agus rialú Diúltach amháin (40 μL, caolaithe le tuaslagáin salanda steiriúla/PBS go dtí an toirt inmhianaithe).
Moltar úsáid a bhaint as na feisteáin tráchtála eastósctha aigéid núicléacha seo a leanas: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Trealamh Mini RNA víreasach (QIAGEN); Trealamh TIANamp Hi-DNA/RNA (TIANGEN);
B. Socrú Measc Frithghníomh
1. Ba chóir gach imoibrí agus sampla a leá go hiomlán, a mheascadh go hiomlán agus a lártheifneoiriú go hachomair ag teocht an tseomra (thart ar raon 18 go 25 céim) sula n-úsáidfear é.
2. Ullmhaigh an toirt riachtanach den Mheascán Imoibrithe i bhfeadán microcentrifuge polapróipiléine de mhéid cuí.
3. Pípéad 25 µL den Mheascán Imoibrithe isteach i ngach tobar de phláta imoibrithe tobair optúil cuí nó d'fheadán imoibrithe optúil cuí.
C. Teimpléad breise
1. Cuir 5 μL de RNA asbhainte leis as Samplaí/Rialú dearfach/Rialú Diúltach. Is é 30 μL an toirt iomlán.
Socrú Imoibrithe | |
Meascán Frithghníomhaithe COVID{0}} | 23.3µL |
COVID{0}}Enzyme Mix | 1.7 µL |
Samplaí nó Rialuithe | 5 µL |
Imleabhar Iomlán | 30µL |
2. Measc na samplaí agus na rialtáin go críochnúil leis an Meascán Frithghníomhaithe trí phíobáil suas agus síos/Vortex.
3. Dún an 96-pláta imoibrithe tobair le cláir chuí nó le scannán optúil ghreamaitheach agus cuir na cláir chuí ar na feadáin imoibrithe.
4. Lártheifneoir an 96-pláta imoibrithe tobair i lártheifneoir le rótar pláta micritriter ar feadh 30 soicind ag thart ar 2500rpm.
D. An Ionstraim PCR Fíor-Ama a Ríomhchlárú
Le haghaidh faisnéis bhunúsach maidir le socrú agus ríomhchlárú na n-ionstraimí PCR fíor-ama éagsúla, féach le do thoil do lámhleabhar úsáideora na hionstraime faoi seach. Tá an measúnú ionstraime optamaithe do chóras PCR Fíor-Ama ABI7500. Déantar an rith PCR le coinníollacha rothaíochta mar a thuairiscítear sa tábla thíos.
Níl. | Céim | Teocht | Fad | Timthriallta | Bailiú sonraí |
1 | Frithghníomh trascríobh droim ar ais | 50 céim | 10 nóim | 1 | / |
2 | Réamh-dhínádúrú | 95 céim | 30 soic | 1 | / |
3 | Nádúrú | 95 céim | 10 soic | 45 | / |
Annealing agus síneadh | 58 céim | 30 soic | Bailiúchán fluaraiseachta pointe deiridh |
Sainmhínigh na brathadóirí fluaraiseachta
Sprioc | Ainm Brathadóir | Tuairisceoir | Ceobhrán |
RNA ar leith COVID{0}} | Sprioc géine ORF1ab | FAM | Dada |
Sprioc N géine | HEX/VIC | Dada | |
Sprioc E géine | ROX | Dada | |
Rialú Inmheánach | géine coimeádaí tí | Cy5 | Dada |
*Socraigh tagairt inmheánach fhluaraiseachta na hionstraime go "None", mar shampla: Le haghaidh ionstraimí sraith ABI socraigh "Tagairt Éighníomhach" go "Nada".
E. Anailís sonraí
Le do thoil socraigh na paraiméadair anailíse agus déan anailís ar na sonraí de réir threoracha oibriúcháin na n-ionstraimí ábhartha.
Tóg ABI 7500 mar shampla:
Ba cheart an Bunlíne a shocrú go dtí raon a scriosann an fhluaraiseacht chúlra a aimsítear i dtimthriallta luatha an aimplithe, ach nach ndéanann forluí ar an limistéar ina n-ardaíonn comharthaí aimpliúcháin os cionn an chúlra (Luach tosaigh: 3~10; Luach deiridh: {{2} }). Ba cheart go mbeadh an Tairseach Rothaíochta (Ct) ag bun na céime easpónantúla. Cliceáil "Anailís" chun toradh na hanailíse a fháil go huathoibríoch, agus léigh an toradh braite sa fhuinneog "Tuarascáil".
Clibeanna Te: adenovirus secretion tástála-nasal tapa, an tSín, soláthróirí, monaróirí, monarcha, mórchóir
Glaoigh Linn
B’fhéidir gur mhaith leat freisin









